布鲁氏菌病是一种人畜共患的慢性传染性疾病,其主要通过患病牛羊、食用未煮熟的牛羊肉和奶制品传播,人群普遍容易感染,且发病隐匿,如果没有早期发现和及时治疗,会反复侵袭人体骨关节、生殖系统以及神经系统,进而造成关节疼痛、长期发热、乏力多汗等问题,严重时候会造成终身残疾。虎红平板凝集试验(RBPT)是最基础、最常用的快速筛查技术,其具有操作简单、结果直观等优势,已经成为基层医疗机构、畜牧防疫部门排查布病首选方法。但很多人对这项检测技术认知模糊,不清晰其检测原理、适用范围以及精准程度,下面就来全面解析虎红平板凝集试验的核心知识与检测机制。

一、什么是虎红平板凝集试验(RBPT)?

虎红平板凝集试验(RBPT)属于一种特异性血清学快速筛查试验,其主要应用于检测人体或者动物血清当中的布鲁氏菌特异性抗体,是布病初筛的核心技术。这项技术核心试剂为虎红染色的布鲁氏菌标准抗原,虎红染料特性可抑制血清中非特异性凝集反应,以此来最大程度规避检测存在的误差,提升筛查准确性。相比传统试管凝集试验,应用RBPT无需复杂实验设备、无需烦琐操作流程、检测周期短,且全程可以在常温下快速完成,该检测方法高灵敏度、低成本、高效率的优势,被纳入我国布病检测技术规范,主要用于人群流行病学普查、高危人群初筛、养殖畜禽批量检测。

二、RBPT快速检出布鲁氏菌抗体的核心原理是什么?

虎红平板凝集试验核心原理在于抗原抗体特异性免疫凝集反应,其主要依托于免疫学特异性结合特征,能快速识别血清当中存在的布鲁氏菌抗体,且整个检测过程科学精准。具体检测机制分为两个步骤,一是试剂准备,需要将灭活、纯化之后的布鲁氏菌菌体,再经过虎红染料染色处理后,制作成为标准化红色抗原悬液,这一抗原仅仅和布鲁氏菌抗体发生特异性结合,并不会和其他病菌抗体产生反应,能确保检测特异性。二是样本反应,取出少量待测血清和虎红抗原悬液,在洁净玻璃板上充分混合,常温静置3—5分钟。如果待测血清当中存在布鲁氏菌特异性抗体,抗原和抗体快速结合以及聚集,就会形成清晰可见的红色颗粒状凝结块。而如果血清当中无对应抗体,抗原抗体无法结合,混合液会保持均匀红色浑浊状态,无凝集现象。虎红染料在整个反应中具有关键作用,其不仅能让凝集结果可视化,方便肉眼观察,也能阻断血清当中IgM非特异性干扰,让早期感染产生的微量抗体也能被快速检出,实现快速、精准的初步排查。

三、RBPT检测的优势、局限性及科学应用规范

1、优势性

从检测优势层面分析,其检测速度较快,全程只需要5—10分钟就可以出结果,远远快于传统血清学检测方法,适合大规模批量筛查,操作门槛较低,不需要精密仪器,基层医护人员和防疫人员都可以快速上手操作。其灵敏度较高,对于布病早期感染以及隐性感染产生的抗体识别能力较强,能及时发现潜在感染者,有效阻断疾病传播。其检测成本低廉,适合大范围流行病学普查,性价比较高。

2、局限性

从局限性进行分析,RBPT是初筛试验,特异性有限,并且存在一定假阳性概率。一些既往感染、疫苗接种人群,血清当中残留的微量抗体会出现弱阳性反应,且少数自身免疫性疾病患者会出现非特异性凝集,进而导致误判。所以RBPT阳性结果不能直接确诊布病,只能代表疑似感染,还要通过试管凝集试验、补体结合试验等确诊试验进一步复核验证,RBPT阴性结果则基本可排除活动性布病感染,可靠性极高。

3、明确规范

在临床应用中,RBPT具有较为明确的应用规范,对于牛羊养殖人员、屠宰加工人员、皮毛加工人员等布病高危人群,就需要优先进行RBPT常态化筛查,对于出现长期低热、关节痛、乏力多汗等疑似布病症状的患者,可以先进行RBPT快速初筛,阳性者立即启动确诊复核流程,进而实现早期发现、早期诊断以及早期治疗。

作者:克什克腾旗疾病预防控制中心 孙春梅

编辑: 冯洁
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